新冠肺炎疫情已成為二戰(zhàn)結(jié)束后最嚴(yán)重的全球公共衛(wèi)生突發(fā)事件,，科學(xué)家們也一直致力于揭開它的神秘面紗：新冠病毒為什么傳染性這么強(qiáng),？它究竟長什么樣,？人類如何戰(zhàn)勝它,？
全球首個(gè)揭示新冠病毒全病毒三維精細(xì)結(jié)構(gòu)及核糖核蛋白復(fù)合物的分子組裝
疫情發(fā)生之初,，李蘭娟院士便帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)開展病毒生物學(xué)研究,，一方面，研究人員想要弄清楚新冠病毒與其他冠狀病毒和普通的流感病毒等在結(jié)構(gòu)上是否有區(qū)別,，另一方面,，研發(fā)疫苗同樣也需要對病毒精細(xì)結(jié)構(gòu)解析。于是,，依托浙大一院傳染病國家醫(yī)學(xué)中心領(lǐng)先全國的病毒學(xué)研究能力與清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院強(qiáng)大的結(jié)構(gòu)生物學(xué)基礎(chǔ),，雙方強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合，歷時(shí)4個(gè)半月開展科研攻關(guān),，取得重大突破,。想要解析全病毒精細(xì)結(jié)構(gòu)實(shí)屬不易！進(jìn)行病毒學(xué)研究,，需要對病毒進(jìn)行有效滅活,，這一過程中化學(xué)滅活劑不恰當(dāng)使用有可能破壞病毒結(jié)構(gòu)，如何既實(shí)現(xiàn)病毒的有效滅活又保證結(jié)構(gòu)完整性,？科研團(tuán)隊(duì)使出“秘密武器”,，利用特殊制樣技術(shù)解決這一難題。自2020年1月19日,，浙大一院收治杭州市**例確診病例,，科學(xué)研究就與臨床救治同時(shí)啟動了。李蘭娟院士團(tuán)隊(duì)通過將一名重癥患者體內(nèi)分離得到的病毒株在體外大量培養(yǎng)并有效滅活,，利用冷凍電鏡斷層掃描技術(shù)持續(xù)對2294顆病毒粒子進(jìn)行了“高分辨率CT掃描”,，從而在電鏡下發(fā)現(xiàn)了病毒最清晰的真實(shí)結(jié)構(gòu)，看上去就像一個(gè)太陽一樣,，形態(tài)與其他的冠狀病毒并無異,，獲得了病毒精確的尺寸大小與形態(tài)、表面刺突蛋白天然構(gòu)象與分布,、病毒內(nèi)部核糖核蛋白復(fù)合物結(jié)構(gòu)及組裝形式等重要信息,。
在此之前，國際上對新冠病毒結(jié)構(gòu)的研究大都聚焦于某一個(gè)蛋白分子,，該研究在國際上首個(gè)成功揭示了真實(shí)的新冠病毒全病毒三維結(jié)構(gòu),，并重構(gòu)出一個(gè)具有代表性的、目前國際上最清晰的3D病毒模型，使“看不見的敵人”清晰地展現(xiàn)在世人面前,，對疫苗及抗體研發(fā),、抗病毒藥物設(shè)計(jì)及篩選、疫情防控宣傳,、科普教育等均有十分重要意義,。冠狀病毒因其如日冕般外圍的冠狀而得名，病毒表面的這些冠狀物質(zhì)叫做刺突蛋白,，是一種糖蛋白,，也是我們能看到的最直觀的病毒結(jié)構(gòu)。它的作用就是感染細(xì)胞,，可以說是病毒進(jìn)入人體細(xì)胞的“鑰匙”,，如果沒有了刺突蛋白，病毒也就不具有感染性了,。目前大多數(shù)對新冠病毒刺突蛋白的研究都是體外重組的,，而該研究直接在病毒上開展科研工作，原位解析了新型冠狀病毒表面刺突蛋白的天然構(gòu)像和分布,?？蒲腥藛T發(fā)現(xiàn)，新冠病毒的刺突蛋白就像“鏈錘”一樣可以在病毒表面自由擺動,，上端粗,、下端細(xì)，這種特性有助于病毒能靈活“抓住”細(xì)胞表面,，與之結(jié)合入侵細(xì)胞,，感染人體。可能新冠病毒也意識到自己已成為全人類的健康公敵,，科研人員還發(fā)現(xiàn),，它的刺突蛋白的朝向也很有趣，懂得“自我保護(hù)”,。如果把刺突蛋白比喻成一把傘,，雨傘張開被稱為“向上”，雨傘關(guān)閉被稱為“向下”,，當(dāng)刺突蛋白向上時(shí),，它就像亮出了自己的武器一樣，大喊著“我要去感染細(xì)胞了,！”此時(shí),，如果人體細(xì)胞不幸被刺中，那么就面臨感染的危險(xiǎn),。而當(dāng)刺突蛋白向下,，它就像收起兵器,，以免被機(jī)體識別擊潰。研究發(fā)現(xiàn),，新冠病毒的刺突蛋白97%都是向下的,，這也就成為它不易被抗體及藥物等擊敗的原因之一。
新冠病毒的分子結(jié)構(gòu),。SARS-CoV-2病毒體具有代表性的冷凍電鏡斷層成像照片（A）,；通過構(gòu)建RBD“向下”（橙色）和1個(gè)RBD“向上”（紅色）構(gòu)象的融合前的S蛋白、脂質(zhì)包膜（灰色）和核糖核蛋白復(fù)合物RNPs（黃色）的模型來重現(xiàn)SARS-CoV-2全病毒三維結(jié)構(gòu)（B）,；精確計(jì)數(shù)了每個(gè)病毒粒子的刺突蛋白和RNP的數(shù)量（C）,； 揭示最具有代表性的RBD“向下”的S蛋白構(gòu)象。目前已經(jīng)在研制的基因工程疫苗都是基于體外重組表達(dá)的刺突蛋白研究成果,，這與病毒原位狀態(tài)下是否存在差異？已研制的疫苗是否對病毒有效,？科研團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步通過質(zhì)譜分析刺突蛋白的糖基化組成,，發(fā)現(xiàn)體外重組表達(dá)的刺突蛋白與病毒原位狀態(tài)刺突蛋白的糖基化修飾具有高度相似性，這對滅活病毒疫苗,、基因工程重組疫苗以及中和抗體的研發(fā)具有重要指導(dǎo)意義,。除了刺突蛋白，新冠病毒的內(nèi)部結(jié)構(gòu)核心——核糖核蛋白復(fù)合物,，在該研究中也取得了重要進(jìn)展,。核糖核蛋白復(fù)合物是病毒核酸與蛋白的結(jié)合體，病毒所有的遺傳信息都儲存在里面,，可以調(diào)控病毒的生物特性,，可謂是“病毒的靈魂”。
核糖核蛋白復(fù)合物RNPs的天然結(jié)構(gòu)及其組裝機(jī)制,。顯示RNP的兩種不同類型的超微結(jié)構(gòu)：六聚體（橙色框）和四聚體（紅色框）,；七個(gè)RNP被包裹在病毒包膜內(nèi)（灰色），形成“巢中蛋”形的六聚體組件,，四個(gè)RNP被包裝成無膜的四聚體組件（下）,；RNP六聚體組裝成球形病毒，四聚體組裝成橢球型病毒,。早前的研究發(fā)現(xiàn)新冠病毒的核糖核酸長度是同類病毒中最長的,，達(dá)到病毒自身直徑的100倍，那么病毒是如何將達(dá)到自身長度100倍的核糖核酸不糾纏,、不打結(jié),、不斷裂、完好無損地裝進(jìn)自己體內(nèi)的,，一直是個(gè)未解之謎,?？蒲袌F(tuán)隊(duì)開創(chuàng)性地揭示了病毒腔內(nèi)核糖核蛋白復(fù)合物天然結(jié)構(gòu)及其組裝機(jī)制，闡明了新冠病毒是如何在80納米的管腔內(nèi)組裝和堆積單股長達(dá)30Kb的核糖核酸,。原來,，這些復(fù)合物像串珠一樣把核糖核酸組織在一起，并在病毒體內(nèi)有序排列,，不僅解決了在有限空間內(nèi)收納超過自身容量核糖核酸的難題,，還加固了病毒本身結(jié)構(gòu)，使它能夠經(jīng)受住人體外復(fù)雜環(huán)境中的各種理化因素破壞的挑戰(zhàn),，這也可以用來解釋新冠病毒長期在外環(huán)境存活的一個(gè)重要因素,。
